摘要：目的通过对具有高效抗肿瘤活性的类抗体偶联药物—--双靶向配体化力达霉素（DTLL）制备过程的优化,获得纯度高和活性强的DTLL产品;探讨影响DTLL稳定性的主要因素,为临床申报和工业化生产提供依据。方法分别对DTLL前体（DTLP）蛋白表达载体、宿主菌株、表达温度、诱导剂终浓度、菌体密度和诱导时间进行优化。以高压破碎法提取可溶性目的蛋白,采用Ni＋亲和与分子筛层析两步纯化,得到高纯度DTLP,再与力达霉素发色团组装获得DTLL。采用HPLC、MTS、ELISA法进行稳定性试验,分别监测DTLL冻干样品的蛋白纯度、发色团含量、细胞毒和亲和力活性的变化。结果经过发酵提取工艺优化,每升发酵液所得DTLP蛋白约为22 mg,是优化前每升9 mg的2.4倍,其蛋白纯度达到99.7%;DTLL组装效率达到68%;稳定性试验结果显示,DTLL冻干样品对光照敏感,在–80℃低温避光环境下可稳定保存。结论成功优化了双靶向配体化力达霉素DTLL的制备工艺,提升了产品纯度和产率,为其后续生产和临床申报提供了实验基础,也为其他抗体偶联药物的制备提供了较成熟完善的技术平台。

摘要：目的发现更多表达小G蛋白ARL8B而ARL8A无表达的肿瘤细胞系,以扩大ARL8B在抗肿瘤药物研究中的应用范围。方法利用实时荧光定量PCR法测定一些肿瘤细胞系中的ARL8B/ARL8A的相对表达量;以ARL8A和ARL8B都表达的细胞系作对照,对新发现的只表达ARL8B的肿瘤细胞系实施siRNA降低ARL8B表达量,用CCK8法检测ARL8B表达量被降低后的细胞活力变化;用Western blot考察ARL8B表达量降低诱导肿瘤细胞凋亡的原因。结果发现MGC-803细胞表达ARL8B而ARL8A无表达,胃癌细胞系BGC-823和MKN-45均表达ARL8A和ARL8B。ARL8B被敲低后MGC-803细胞出现了明显的凋亡,BGC-823和MKN-45细胞无明显的凋亡出现。细胞自噬水平显著提高是引起细胞凋亡的原因。结论 MGC-803细胞系来源于胃低分化黏液样腺癌患者,是新发现的表达ARL8B而ARL8A无表达的肿瘤细胞系,降低ARL8B表达能导致明显的细胞凋亡,提示ARL8B是抗胃低分化黏液样腺癌潜在的药物作用靶标。

摘要：目的观察膝关节持续被动活动仪（CPM）体内力学刺激对组织工程软骨修复大动物关节负重区软骨缺损效果的影响。方法研究、设计和制造能够适用于体内力学刺激羊膝关节软骨缺损修复的膝关节连续被动活动仪（CPM）;将实验动物（山羊膝关节双髁负重区制造直径6 mm软骨缺损）分为三组：空白组：单纯缺损未植入修复组织;藻酸钙＋骨膜＋细胞组：藻酸钙复合自体软骨细胞凝胶植入软骨缺损区,自体骨膜覆盖缺损区;藻酸钙＋骨膜＋细胞＋CPM组：藻酸钙复合自体软骨细胞凝胶植入软骨缺损区,自体骨膜覆盖缺损区,术后早期接受CPM锻炼。分别于术后3个月、6个月、12个月（12个月组仅包括CPM力学刺激组）取材,通过修复组织的大体、组织学观察及其评分比较3组软骨修复效果。结果藻酸钙复合软骨细胞能够较好地修复羊负重区关节面软骨缺损,将缺损修复的大体观察、组织学等结果进行单因素统计学分析,发现接受体内CPM力学刺激组效果最好,其修复组织中透明软骨比例最多,其次为藻酸钙＋骨膜＋细胞组。结论膝关节持续被动活动仪（CPM）体内力学刺激能够促进组织工程软骨修复大动物关节负重区软骨缺损的效果。

摘要：目的检测乙酰肝素酶（HPA）过表达对血管内皮细胞增殖、迁移及血管活性因子表达的影响,进一步揭示HPA参与调节动脉粥样硬化斑块内血管新生过程的作用机制。方法构建HPA基因的过表达载体,转染HUVEC细胞。利用Western blot检测HPA蛋白的过表达情况。利用CCK8法检测细胞增殖情况,细胞迁移实验检测HPA对细胞迁移能力的影响。利用Western blot检测HPA对Ang2和Tie2蛋白表达的影响。结果构建的HPA表达载体转染HUVEC细胞后可使HPA蛋白水平明显上调。随着转染时间的增加,HPA转染组的相对增殖率可达对照组的2~3倍。HPA转染组的穿膜细胞数明显多于对照组。HPA转染组的Ang2和Tie2的蛋白表达水平高于对照组。结论 HPA过表达可提高HUVEC细胞的增殖和迁移能力,促进血管活性分子Ang2和Tie2的表达,提示HPA可能通过调控Ang2/Tie2的表达来影响易损斑块内病理性血管新生。

摘要：目的自主研制用于检测白血病染色体PML/RARα融合基因的双色荧光原位杂交（FISH）检测试剂盒。方法根据染色体基因图谱,选定合适的细菌人工染色体（BAC）克隆重叠群分别作为PML基因探针和RARα基因探针。对入选的BAC克隆进行STS-PCR鉴定和荧光原位杂交鉴定。最后将完成鉴定的PML探针标记红色荧光素,RARα探针标记绿色荧光素,加上配套试剂组成FISH检测试剂盒。用双盲法检测白血病临床样本37例,对自制探针和同类进口探针在各项技术参数上进行对比研究。结果自制试剂盒检测PML/RARα融合基因与进口探针相比,其阴、阳性率和同类进口产品完全符合;自制探针的荧光信号更强,信噪比更高。结论自主研制的PML/RARα融合基因FISH检测试剂盒设计合理、质量可靠,可用于替代价格昂贵的进口产品。